Антигенные свойства изолята коронавируса SARS-CoV-2/human/RUS/Nsk-FRCFTM-1/202, выделенного от пациента в Новосибирске


https://doi.org/10.22625/2072-6732-2020-12-3-42-50

Полный текст:


Аннотация

Цель: изоляция коронавируса SARS-CoV-2 из образцов носоглоточных мазков, положительных на наличие РНК SARS-CoV-2, получение инактивированного цельновирионного антигена и изучение его антигенных свойств.
Материалы и методы: изоляцию вируса проводили на культуре клеток Vero из вируссодержащего образца клинического материала (мазок из носоглотки). Эффективность репликации вируса SARS-CoV-2 на культуре клеток оценивали по динамике появления цитопатического действия и наличию вирусной РНК при анализе культуральной жидкости методом обратной транскрипции – полимеразной цепной реакции. Очистку, концентрацию и инактивацию вирусного препарата проводили по стандартной методике. Степень чистоты очищенного препарата и профиль вирусных белков определяли методом электрофореза в 10% полиакриламидном геле с добавлением додецилсульфата натрия. Наличие и специфичность вирусных белков выявляли с помощью сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом «COVID-19» методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга.
Результаты: из вируссодержащего клинического образца был выделен изолят SARS-CoV-2/human/RUS/ Nsk-FRCFTM-1/2020 и получен очищенный, концентрированный, инактивированный цельновирионный антиген, содержащий три структурных белка – гликопротеин S (примерно 200 кДа), нуклеопротеин N (48 кДа) и матриксный М (20-25 кДа), выявляемые антителами сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом COVID-19.
Заключение: показана возможность изоляции коронавируса SARS-CoV-2 на культуре клеток Vero. В очищенном вирусном препарате, инактивированном в лизирующем растворе, сохраняется антигенная специфичность трех структурных вирусных белков (S, N, и М), выявляемых антителами сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом COVID-19. Инактивированный цельновирионный антиген изолята SARS-CoV-2/human/ RUS/Nsk-FRCFTM-1/2020 может быть использован для изучения антигенных иммуномодулирующих свойств вирусных белков, получения иммунных сывороток лабораторных животных, а также в качестве компонента тест-систем для выявления специфичных антител методом ИФА и иммуноблоттинга.


Об авторах

А. А. Чепурнов
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия

Чепурнов Александр Алексеевич – ведущий научный сотрудник отдела экспериментального моделирования и патогенеза инфекционных заболеваний, д.б.н., профессор 

Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05



К. А. Шаршов
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Шаршов Кирилл Александрович – заведующий лабораторией моделирования и мониторинга инфекционных процессов, к.б.н.Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


Е. И. Казачинская
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия

Казачинская Елена Ивановна – ведущий научный сотрудник отдела экспериментального моделирования и патогенеза инфекционных заболеваний, д.б.н.

Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05



Ю. В. Кононова
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Кононова Юлия Владимировна – старший научный сотрудник отдела экспериментального моделирования и патогенеза инфекционных заболеваний, к.б.н. Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


Е. А. Казачкова
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
 Казачкова Евгения Александровна – младший научный сотрудник лаборатории моделирования и мониторинга инфекционных процессов
Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


О. П. Хрипко
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия

Хрипко Ольга Павловна – старший научный сотрудник отдела экспериментального моделирования и патогенеза инфекционных заболеваний, к.б.н. 

Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05



К. С. Юрченко
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Юрченко Ксения Сергеевна – старший научный сотрудник лаборатории моделирования и мониторинга инфекционных процессов, к.б.н.Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


А. Ю. Алексеев
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Алексеев Александр Юрьевич – заведующий лабораторией разработки и испытания фармакологических средств, к.б.н.Новосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


М. И. Воевода
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Воевода Михаил Иванович – Врио директора, д.м.н., профессор, академик РАН Новосибирск; тел.: 8(383)333-65-37


А. М. Шестопалов
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Россия
Шестопалов Александр Михайлович – заведующий отделом экспериментального моделирования и патогенеза инфекционных заболеваний, д.б.н., профессорНовосибирск; тел.: 8(383)335-94-05


Список литературы

1. Virus Taxonomy: 2019 Release. EC 51, Berlin, Germany, July 2019. [Электронный ресурс]. URL: https://talk.ictvonline.org/taxonomy/ (дата обращения 10.06.2020).

2. Masters, P.S. The molecular biology of coronaviruses / P.S. Masters // Adv. Virus. Res. – 2006. – Vol. 66. – P. 193- 292. – doi: 10.1016/S0065-3527(06)66005-3.

3. Accessory proteins of SARS-CoV and other coronaviruses / D.X. Liu, T.S. Fung, K.K. Chong, et al. // Antiviral Res. – 2014. – Vol. 109. – P. 97-109. – doi: 10.1016/j.antiviral.2014.06.013.

4. The origin, transmission and clinical therapies on coronavirus disease 2019 (COVID-19) outbreak – an update on the status / Y.R. Guo, Q.D. Cao, Z.S. Hong, et al. // Mil. Med. Res. – 2020. – Vol. 7. – N. 1. – P. 11. – doi: 10.1186/s40779-020-00240-0.

5. Вступительное слово Генерального директора ВОЗ на брифинге по COVID-19 для постоянных представительств – 12 марта 2020 г. [Электронный ресурс]. URL: https://www.who.int/ru/dg/speeches/detail/who-directorgeneral-s-opening-remarks-at-the-mission-briefing-on-covid-19---12-march-2020 (дата обращения 19.06.2020).

6. Virus Isolation from the First Patient with SARS-CoV-2 in Korea / W.B. Park, N.J. Kwon, S.J. Choi, et al. // J. Korean Med. Sci. – 2020 – Vol. 35. – N. 7. – e84. – doi: 10.3346/jkms.2020.35.e84.

7. Получение очищенного вируса Эбола / А.А. Чепурнов [и др.] // Вопросы вирусологии. – 1994. – Т. 39, № 6. – С. 254–257.

8. Разумов, И.А. Антигенные отличия дикого и адаптированного к морским свинкам штаммов вируса Эбола / И.А. Разумов, Е.И. Казачинская, А.А. Чепурнов // Вопросы вирусологии. – 2010. – Т. 55. – №. 6. – С. 35-38.

9. Взаимодействие фрагментов оболочечного белка вируса Зика с антителами сывороток людей, переболевших флавивирусными инфекциями / Д.В. Шаньшин [и др.] // Инфекция и иммунитет. – 2020. – Т. 10, № 1. – С. 73– 82. – doi: 10.15789/2220-7619-AIO-805.

10. Казачинская, Е.И. Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L. 5Н6 – продуцент моноклональных антител для выявления гликопротеина Е вируса Западного Нила; моноклональные антитела 5Н6, продуцируемые указанным штаммом гибридных клеток и иммуноферментный набор для выявления гликопротеина вируса Западного Нила с использованием указанных моноклональных антител / Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, В.Б. Локтев // Патент на изобретение RU 2595429 C1, 27.08.2016. Заявка № 2015115059/10 от 21.04.2015.

11. Sturman L.S. I. Structural Proteins: Effects of Preparative Conditions on the Migration of Protein in Polyacrylamide Gels. / L.S. Sturman. // J. Virol. – 1977. – Vol. 77. – N. 2. – P. 637- 649. – doi: 10.1016/0042-6822(77)90488-3.

12. Dea S. Identification and Location of the Structural Glycoproteins of a Tissue Culture-Adapted Turkey Enteric Coronavirus. / S. Dea, S. Garzon, P. Tijssen // Arch Virol. – 1989. – Vol. 106. –N. 3-4. – P. 221-237. doi: 10.1007/BF01313955.

13. A complete sequence and comparative analysis of a SARS-associated virus (Isolate BJ01) / E.D. Qin, Q.Y. Zhu, M. Yu, et al. // Chin. Sci. Bull. – 2003. – N. 48. – P. 941-948. doi: 10.1007/BF03184203.

14. Rapid Development of an Inactivated Vaccine Candidate for SARS-CoV-19 / Q. Gao, L. Bao, M. Haiyan, et al. // Science. – 2020. – eabc1932. – doi: 10.1126/science.abc1932

15. Kuo L. Analyses of Coronavirus Assembly Interactions With Interspecies Membrane and Nucleocapsid Protein Chimeras. / L. Kuo, K.R. Hurst-Hess, C.A. Koetzner, et al. // J. Virol. – 2016. – Vol. 90. – N. 9. – P. 4357-4368. – doi: 10.1128/JVI.03212-15.

16. Liu X. Profile of Antibodies to the Nucleocapsid Protein of the Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-associated Coronavirus in Probable SARS Patients. / X. Liu, Y. Shi, P. Li, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2004. – Vol. 11. – N. 1. – P. 227-228. – doi: 10.1128/cdli.11.1.227-228.2004.

17. van der Hoek L. Human coronaviruses: what do they cause? / L. van der Hoek // Antivir. Ther. – 2007. – Vol. 12. – N. 4. – Pt. B. – P. 651-658.

18. SARS and MERS: recent insights into emerging coronaviruses / E. de Wit, N. van Doremalen, D. Falzarano, et al. // Nat. Rev. Microbiol. – 2016. – Vol. 14. – N. 8. P. 523-534. – doi: 10.1038/nrmicro.2016.81.

19. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor / M. Hoffmann, H. Kleine-Weber, S. Schroeder, et al. // Cell. – 2020. – Vol. 181. – N. 2. – P. 271-280. – e8. – doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052.

20. Use of viral lysate antigen combined with recombinant protein in Western immunoblot assay as confirmatory test for serodiagnosis of severe acute respiratory syndrome / M. Guan, H.Y. Chen, P.H. Tan, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2004 – Vol. 11. – N. 6. P. 1148–1153. – doi: 10.1128/CDLI.11.6.1148-1153.2004.

21. Antibody responses to individual proteins of SARS coronavirus and their neutralization activities / M. Qiu, Y. Shi, Z. Guo, et al. // Microbes Infect./Institut Pasteur. – 2005. – Vol. 7. – N. (5-6). – P. 882-889. – doi: 10.1016/j.micinf.2005.02.006.

22. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study / K.K. To, O.T. Tsang, W.S. Leung, et al. // Lancet Infect. Dis. – 2020. – Vol. 20. – N. 5. – P. 565-574. – doi: 10.1016/S1473-3099(20)30196-1.

23. Profile of IgG and IgM antibodies against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) / J. Qu, C. Wu, X. Li, et al. // Clin. Infect. Dis. – 2020. – ciaa489. – doi: 10.1093/cid/ciaa489.

24. Serological responses in patients with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection and cross-reactivity with human coronaviruses 229E, OC43, and NL63. / K.H. Chan, V.C. Cheng, P.C. Woo, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2005. Vol. 12. – N. 11. – P. 1317-1321. – doi: 10.1128/CDLI.12.11.1317-1321.2005.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Чепурнов А.А., Шаршов К.А., Казачинская Е.И., Кононова Ю.В., Казачкова Е.А., Хрипко О.П., Юрченко К.С., Алексеев А.Ю., Воевода М.И., Шестопалов А.М. Антигенные свойства изолята коронавируса SARS-CoV-2/human/RUS/Nsk-FRCFTM-1/202, выделенного от пациента в Новосибирске. Журнал инфектологии. 2020;12(3):42-50. https://doi.org/10.22625/2072-6732-2020-12-3-42-50

For citation: Chepurnov A.A., Sharshov K.A., Kazachinskaya E.I., Kononova Y.V., Kazachkova E.A., Khripko O.P., Yurchenko K.S., Alekseev A.Y., Voevoda M.I., Shestopalov A.M. Antigenic properties of sARs-CoV-2/human/RUs/nsk-FRCFtM-1/2020 coronavirus isolate from a patient in novosibirsk. Journal Infectology. 2020;12(3):42-50. (In Russ.) https://doi.org/10.22625/2072-6732-2020-12-3-42-50

Просмотров: 69

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2072-6732 (Print)