jofinЖурнал инфектологииJournal Infectology2072-6732IPO “АIDSSPbR"10.22625/2072-6732-2022-14-2-128-138jofin-1361Research ArticleОригинальные исследованияOriginal ResearchДиагностическое значение количественного определения ДНК вируса Эпштейна – Барр в лейкоцитах крови у детей при инфекционном мононуклеозеDiagnostic value of Epstein – Barr virus DNA quantification in blood leukocytes in children with infectious mononucleosisПопковаМ. И.PopkovaM. I.

Попкова Мария Игоревна – ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии; к.м.н.; тел.: 8(831)469-79-46, +7-906-352-60-15

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

popmarig@mail.ruФилатоваЕ. Н.FilatovaE. N.

Филатова Елена Николаевна – ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии; к.б.н.; тел.: 8(831)469-79-46

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

filatova@nniiem.ruСоболеваЕ. А.SobolevaE. A.

Соболева Евгения Андреевна – врач-инфекционист; тел.: 8(831) 214-0-214

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

Fullofcarrot@pimunn.ruБрызгаловаД. А.BryzgalovaD. A.

Брызгалова Дарья Алексеевна – младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии; тел.: 8(831)469-79-46

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

moskvinadara7@gmail.comКуловаЕ. А.KulovaE. A.

Кулова Екатерина Александровна – врач-инфекционист, аллерголог-иммунолог; к.м.н.; тел.: 8(831)411-11-55

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

dr_kulova@mail.ruСахарновН. А.SakharnovN. A.

Сахарнов Николай Александрович – научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии; тел.: 8(831)469-79-46

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

saharnov@nniiem.ruУткинО. В.UtkinO. V.

Уткин Олег Владимирович – ведущий научный сотрудник – заведующий лабораторией молекулярной биологии и биотехнологии; к.б.н.; тел.: 8(831)469-79-45

Нижний Новгород

Nizhny Novgorod

utkino2004@mail.ruНижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. БлохинойРоссияNizhny Novgorod Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after academician I.N. BlokhinaRussian FederationНижегородский областной центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниямиРоссияNizhny Novgorod Regional Center for the Prevention and Control of AIDS and Infectious DiseasesRussian Federation«Тонус Кроха и семейная СТОМАТОЛОГИЯ»РоссияTonus Krokh and family DENTISTRYRussian Federation202213072022142128137Copyright © Попкова М.И., Филатова Е.Н., Соболева Е.А., Брызгалова Д.А., Кулова Е.А., Сахарнов Н.А., Уткин О.В., 20222022Попкова М.И., Филатова Е.Н., Соболева Е.А., Брызгалова Д.А., Кулова Е.А., Сахарнов Н.А., Уткин О.В.Popkova M.I., Filatova E.N., Soboleva E.A., Bryzgalova D.A., Kulova E.A., Sakharnov N.A., Utkin O.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.niidi.ru/jofin/article/view/1361Цель

Цель: определение порогового значения вирусной нагрузки вируса Эпштейна – Барр в лейкоцитах крови для совершенствования лабораторной диагностики инфекционного мононуклеоза у детей.

Материалы и методы

Материалы и методы: в лейкоцитах крови детей 1–17 лет (n=163) проведено количественное определение ДНК ВЭБ методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Сравнительный анализ вирусной нагрузки выполнен в группах пациентов с инфекционным мононуклеозом ВЭБ-этиологии (n=67), не ВЭБ-этиологии (n=25) и здоровых доноров (n=25). Пороговое значение установлено на основе анализа данных вирусной нагрузки у детей с активной и латентной ВЭБ-инфекцией. Статистическая обработка данных проводилась с использованием языка программирования R и среды RStudio.

Результаты

Результаты. Показано, что ДНК вируса Эпштейна – Барр обнаруживается в лейкоцитах крови при инфекционном мононуклеозе, не связанном с ВЭБ, и у здоровых вирусоносителей, однако вирусная нагрузка в этих группах значительно ниже, чем у пациентов с ВЭБ-мононуклеозом (p<0,001). Установлено пороговое значение вирусной нагрузки на уровне 41 копия/105 клеток (или 1,6 lg ДНК ВЭБ/105 клеток). Применение такого порога позволяет достичь приемлемых значений специфичности и чувствительности (0,90 и 0,85 соответственно) лабораторной диагностики. Высокая вирусная нагрузка (равная или выше установленного порогового значения) ассоциирована с повышенным в 8,5 раз риском выявления активной ВЭБ-инфекции по сравнению с детьми, у кого определяется низкая вирусная нагрузка (ниже установленного порогового значения) (ОР 8,5; 95% ДИ: 3,7–19,7; p<0,001).

Заключение

Заключение. Предложена диагностическая стратегия лабораторного подтверждения активной ВЭБ-инфекции, а также инфекционного мононуклеоза как ее основной клинической формы. В целом, полученные результаты создают предпосылки для более интенсивного внедрения количественных исследований ДНК ВЭБ в лейкоцитах крови как в контексте совершенствования ранней диагностики инфекционного мононуклеоза и его этиологической расшифровки, так и в разрезе детализации особенностей течения ВЭБ-инфекции.

Aim

Aim. To determine the threshold value of the Epstein-Barr virus (EBV) viral load (VL) in blood leukocytes to improve the laboratory diagnostics of infectious mononucleosis in children.

Materials and methods

Materials and methods. EBV DNA quantification in blood leukocytes in children aged 1-17 years (n=163) was determined by real-time polymerase chain reaction. VL were compared in groups of EBV mononucleosis (n=67), non-EBV mononucleosis (n=25) and healthy donors (n=25). Threshold was determined based on VL data from children with active and latent EBV infection. The R program and the RStudio environment were used for satistic analysis.

Results

Results. EBV DNA is found in blood leukocytes in infectious mononucleosis not associated with EBV and in healthy virus carriers, however VL in these groups is significantly lower than in patients with EBV mononucleosis (p<0.001). The threshold value was determined – 41 copies/105 cells (or 1.6 lg of EBV DNA/105 cells), which was characterized by acceptable values of specificity and sensitivity (0.90 and 0.85, respectively) of laboratory diagnostics. High EBV VL (equal to or above the set threshold) is associated with an 8.5-fold increased risk of detecting active EBV infection compared to children who have a low VL (below a set threshold) (RR 8.5; 95% CI: 3.7–19.7, p<0.001).

Conclusion

Conclusion. In general, the results obtained create prerequisites for more intensive implementation of quantitative studies of EBV DNA in blood leukocytes, both in the context of improving the early diagnosis of infectious mononucleosis and its etiological interpretation, and in terms of detailing the features of the course of EBV infection.

вирус Эпштейна – БаррДНК ВЭБвирусная нагрузкапороговое значениеинфекционный мононуклеозВЭБ-инфекциялейкоциты кровиПЦРEpstein-Barr virusEBV DNAviral loadthreshold valueinfectious mononucleosisEBV infectionblood leukocytesPCRReferencesМартынова, Г.П. Клинические рекомендации (протокол лечения) оказания медицинской помощи детям больным инфекционным мононуклеозом [Электронный ресурс] / Г.П. Мартынова [и др.]. Код протокола: 91500.11. В27.001-2013. Доступно по ссылке: http://niidi.ru/dotAsset/a6816d03-b0d9-4d37-9b09-540f48e3ed43.pdf (дата обращения 21.03.2022).Martynova G.P., Kuznetsova N.F., Mazankova L.N., Sharipova E.V. Clinical recommendations (treatment protocol) for providing medical care to children with infectious mononucleosis [Internet]. 2013 [cited 2022 Mar 21]. Protocol code: 91500.11. В27.001-2013 (In Russian). Available from: http://niidi.ru/dotAsset/a6816d03-b0d9-4d37-9b09-540f48e3ed43.pdfДемина, О.И. Инфекционный мононуклеоз у детей: клинико-лабораторная характеристика в зависимости от этиологии и фазы инфекционного процесса / О. И. Демина [и др.] // Инфекционные болезни. – 2020. – Т. 18, № 3. С. 62–72.Demina O.I., Chebotareva T.A., Mazankova L.N., Tetova V.B., Uchaeva O.N. Infektsionnye Bolezni. 2020; 18(3): 62–72 (In Russian).Шамшева, О.В. Результаты многолетнего изучения герпесвирусной инфекции на кафедре инфекционных болезней у детей РНИМУ / О. В. Шамшева [и др.] // Детские инфекции. – 2017. – Т. 16, № 2. – С. 5–12.Shamsheva O.V., Kharlamova F.S., Egorova N.Yu., Molochkova O.V., Novosad E.V., Simonova E.V., et al. Detskie Infektsii. 2017; 16(2): 5-12 (In Russian).Демина, О.И. Клиническая значимость вирусологических методов верификации этиологии инфекционного мононуклеоза / О. И. Демина [и др.] // Детские инфекции. – 2020. – Т. 19, № 2. – С. 29–37.Demina O. I., Tikhomirov D.S., Chebotarеva T.A., Mazankova L.N., Tupolevа T.A. Detskie Infektsii. 2020; 19(2): 29-37 (In Russian).Yang Y, Gao F. Clinical characteristics of primary and reactivated Epstein-Barr virus infection in children. J Med Virol. 2020 Jul;92(12):3709-16.Yang Y, Gao F. Clinical characteristics of primary and reactivated Epstein-Barr virus infection in children. J Med Virol. 2020 Jul;92(12):3709-16.О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2020 году: Государственный доклад [Электронный ресурс]. – М. : Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2021. – 256 с. – Доступно по ссылке: https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=18266 (дата обращения 21.03.2022).On the state of sanitary and epidemiological well-being of the population in the Russian Federation in 2020: State report [Internet]. Moscow: Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing; 2021 [cited 2022 Mar 21] (In Russian). Available from: https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=18266Михнева, С.А. Инфекционный мононуклеоз: пространственно-временное проявление эпидемического процесса / С.А. Михнева [и др.] // Здоровье населения и среда обитания. – 2018. – № 10. – С. 50–54.Mikhneva S.A., Martinov Yu.V., Kukhtevich E.V., Grishina Yu.Yu. Zdorovʹe naseleniâ i sreda obitaniâ. 2018; 10(307): 50-4 (In Russian).Попкова, М.И. Особенности эпидемического процесса инфекционного мононуклеоза в Нижегородской области в современный период / М.И. Попкова, О.В. Уткин // Здоровье населения и среда обитания. – 2021. – № 4. – С. 79–86.Popkova M.I., Utkin O.V. Zdorovʹe naseleniâ i sreda obitaniâ. 2021; (4): 79-86 (In Russian).Тимченко, В.Н. ВЭБ-мононуклеоз на госпитальном этапе: клиническая характеристика и этиотропная терапия у детей различного возраста / В.Н. Тимченко [и др.] // Педиатр. – 2018. – Т. 9, № 6. – С. 77–82.Timchenko V.N., Bannova S.L., Pavlova N.V., Pavlova E.B., Kaplina T.A., Fedorova A.V., et al. Pediatr (St. Petersburg). 2018; 9(6): 77-82 (In Russian).Хакизимана, Ж.К. ВЭБ-мононуклеоз у детей в современных условиях / Ж.К. Хакизимана [и др.] // Детские инфекции. – 2020. – Т. 19, № 2. – С. 23-28.Hakizimana J.K., Timchenko V.N., Shakmaeva M.A., Kaplina T.A., Subbotina M.D., Bannova S.L., et al. Detskie Infektsii. 2020; 19(2): 23-8 (In Russian).Демина, О.И. Клинические проявления инфекционного мононуклеоза при первичной или реактивированной герпесвирусной инфекции / О.И. Демина [и др.] / / Рос. вестн. перинатол. и педиатр. – 2020. – Т. 65, № 1. – С. 37–44.Demina O.I., Chebotareva T.A., Mazankova L.N., Tetova V.B., Uchaeva O.N. Ros Vestn Perinatol i Pediatr. 2020; 65(1): 37–44 (In Russian).Никольский, М.А. Ошибки диагностики инфекционного мононуклеоза у детей / М.А. Никольский, Е.Д. Соколова, Д.А. Лиознов // Consilium Medicum. Педиатрия (Прил.). – 2016. – № 3. – С. 24–28.Nikolskiy M.A., Sokolova E.D., Lioznov D.A. Consilium Medicum. Pediatriya (Pril.). 2016; (3): 24-8 (In Russian).Михнева, С.А. Оценка качества клинической диагностики инфекционного мононуклеоза. / С.А. Михнева [и др.] // Практическая медицина. – 2019. – Т. 17, № 8. – С. 54–57.Mikhneva S.A., Martynov Yu.V., Popova T.I., Kukhtevich E.V., Grishina Yu.Yu. Prakticheskaya meditsina. 2019; 17(8): 54-7 (In Russian).Naughton P, Healy M, Enright F, Lucey B. Infectious Mononucleosis: diagnosis and clinical interpretation. Br J Biomed Sci. 2021 Jul;78(3):107-16.Naughton P, Healy M, Enright F, Lucey B. Infectious Mononucleosis: diagnosis and clinical interpretation. Br J Biomed Sci. 2021 Jul;78(3):107-16.Львов, Н.Д. Ключевые вопросы диагностики Эпштейна-Барр вирусной инфекции / Н.Д. Львов, Е.А. Дудукина // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. – 2013. – №3. – С. 24–32.Lvov N.D., Dudukina E.A. Infektsionnyye bolezni: novosti, mneniya, obucheniye. 2013; (3): 24-32 (In Russian).Kawada J, Kamiya Y, Sawada A, et al. Viral DNA Loads in Various Blood Components of Patients With Epstein-Barr Virus–Positive T-Cell/Natural Killer Cell Lymphoproliferative Diseases. The Journal of Infectious Diseases. 2019 Oct;220(8):1307–11.Kawada J, Kamiya Y, Sawada A, et al. Viral DNA Loads in Various Blood Components of Patients With Epstein-Barr Virus–Positive T-Cell/Natural Killer Cell Lymphoproliferative Diseases. The Journal of Infectious Diseases. 2019 Oct;220(8):1307–11.Kedi W, Dongjiang X, Zhi L, et al. The rational specimen for the quantitative detection of Epstein-Barr virus DNA load. Clin Chem Lab Med. 2019 Apr;57(5):759-65.Kedi W, Dongjiang X, Zhi L, et al. The rational specimen for the quantitative detection of Epstein-Barr virus DNA load. Clin Chem Lab Med. 2019 Apr;57(5):759-65.Smatti MK, Al-Sadeq DW, Ali NH, et al. Epstein-Barr Virus Epidemiology, Serology, and Genetic Variability of LMP-1 Oncogene Among Healthy Population: An Update. Front Oncol. 2018 Jun;8:211.Smatti MK, Al-Sadeq DW, Ali NH, et al. Epstein-Barr Virus Epidemiology, Serology, and Genetic Variability of LMP-1 Oncogene Among Healthy Population: An Update. Front Oncol. 2018 Jun;8:211.Kimura H, Kwong YL. EBV Viral Loads in Diagnosis, Monitoring, and Response Assessment. Front Oncol. 2019 Feb;9:62.Kimura H, Kwong YL. EBV Viral Loads in Diagnosis, Monitoring, and Response Assessment. Front Oncol. 2019 Feb;9:62.Shi T, Huang L, Luo L, et al. Diagnostic value of serological and molecular biological tests for infectious mononucleosis by EBV in different age stages and course of the disease. J Med Virol. 2021 Jun;93(6):3824-34.Shi T, Huang L, Luo L, et al. Diagnostic value of serological and molecular biological tests for infectious mononucleosis by EBV in different age stages and course of the disease. J Med Virol. 2021 Jun;93(6):3824-34.Meng LJ, Yu FY, Wang J, Zhang H. [The application of quantitative analysis of EBV DNA loads in plasma and peripheral blood mononuclear cells in Epstein-Barr Virus infectionrelated diseases in children]. Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi. 2021 Sep;55(9):1083-8.Meng LJ, Yu FY, Wang J, Zhang H. [The application of quantitative analysis of EBV DNA loads in plasma and peripheral blood mononuclear cells in Epstein-Barr Virus infectionrelated diseases in children]. Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi. 2021 Sep;55(9):1083-8.Yu S, Yang Q, Wu J, et al. Clinical application of Epstein-Barr virus DNA loads in Epstein-Barr virus-associated diseases: A cohort study. J Infect. 2021 Jan;82(1):105-11.Yu S, Yang Q, Wu J, et al. Clinical application of EpsteinBarr virus DNA loads in Epstein-Barr virus-associated diseases: A cohort study. J Infect. 2021 Jan;82(1):105-11.Holden DW, Gold J, Hawkes CH, et al. Epstein Barr virus shedding in multiple sclerosis: Similar frequencies of EBV in saliva across separate patient cohorts. Mult Scler Relat. Disord. 2018 Oct;25:197–9.Holden DW, Gold J, Hawkes CH, et al. Epstein Barr virus shedding in multiple sclerosis: Similar frequencies of EBV in saliva across separate patient cohorts. Mult Scler Relat. Disord. 2018 Oct;25:197–9.Byrne CM, Johnston C, Orem J, et al. Examining the dynamics of Epstein-Barr virus shedding in the tonsils and the impact of HIV-1 coinfection on daily saliva viral loads. PLoS Comput Biol. 2021 Jun;17(6):e1009072.Byrne CM, Johnston C, Orem J, et al. Examining the dynamics of Epstein-Barr virus shedding in the tonsils and the impact of HIV-1 coinfection on daily saliva viral loads. PLoS Comput Biol. 2021 Jun;17(6):e1009072.Kasifoglu N, Oz S, Dinleyici EC, et al. Comparison of Methods Used for the Diagnosis of Epstein-Barr Virus Infections in Children. Pol J Microbiol. 2018 Mar;67(1):81-8.Kasifoglu N, Oz S, Dinleyici EC, et al. Comparison of Methods Used for the Diagnosis of Epstein-Barr Virus Infections in Children. Pol J Microbiol. 2018 Mar;67(1):81-8.Пермякова, А.В. О возрастных особенностях инфекционного мононуклеоза / А.В. Пермякова, И.И. Львова, А.Ю. Дерюшева // Пермский медицинский журнал. 2017. – Т. XXXIV, № 5. – С. 63–68.Permyakova A.V., Lvova I.I., Deryusheva A.Yu. Permskiy meditsinskiy zhurnal. 2017; 34(5): 63–8 (In Russian).Попкова, М.И. Методические основы дифференциальной детекции ВЭБ1/ВЭБ2 и ВГЧ6A/ВГЧ6B / М.И. Попкова [и др.] // Инфекция и иммунитет. – 2021. – Т. 11, № 6. – С. 1057–1066.Popkova M.I., Utkin O.V., Soboleva E.A., Sakharnov N.A., Bryzgalova D.A., Senatskaia A.O., Kulova E.A. Infektsiya i immunitet. 2021; 11(6): 1057–66 (In Russian).Babcock GJ, Decker LL, Volk M, Thorley-Lawson DA. EBV persistence in memory B cells in vivo. Immunity. 1998 Sep;9(3):395-404.Babcock GJ, Decker LL, Volk M, Thorley-Lawson DA. EBV persistence in memory B cells in vivo. Immunity. 1998 Sep;9(3):395-404.Hayden RT, Sun Y, Tang L, et al. Progress in Quantitative Viral Load Testing: Variability and Impact of the WHO Quantitative International Standards. J Clin Microbiol. 2017 Feb;55(2):423-30.Hayden RT, Sun Y, Tang L, et al. Progress in Quantitative Viral Load Testing: Variability and Impact of the WHO Quantitative International Standards. J Clin Microbiol. 2017 Feb;55(2):423-30.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.